T3 DNA Ligase

The following reagents are supplied with this product:

NEB #	Component Name	Component #	Stored at (°C)	Amount	Concentration
NEB # Stored at (°C) M0317S -20 Component Name Component # Stored at (°C) Amount Concentration T3 DNA Ligase M0317SVIAL -20 1 x 0.034 ml 3,000,000 units/ml StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 1 x 1 ml 2 X
NEB # Stored at (°C) M0317L -20 Component Name Component # Stored at (°C) Amount Concentration T3 DNA Ligase M0317LVIAL -20 1 x 0.25 ml 3,000,000 units/ml StickTogether™ DNA Ligase Buffer B0535AVIAL -20 3 x 1 ml 2 X

Application Features

• 制限酵素消化によって生成されたDNAフラグメントのクローニング
• PCR産物のクローニング
• dsDNAへのリンカーやアダプターの追加
• 直鎖DNAの環状化
• dsDNAにおけるニックのシーリング
• 部位特異的変異導入

1. ATPはこの反応に不可欠な補因子である。これはNADを必要とするE. coli DNA Ligaseと異なる。
2. T3 DNA LigaseはPEG 6000を含まないバッファー中でも活性を示す。そのため、PEG 6000が有害となる用途の場合、T4 DNA Ligase BufferやNEBufferなどを使用するとよい。ただし反応に終濃度1 mM ATPを忘れずに添加する。これらのバッファー中では、T3 DNA Ligaseの活性が約10分の1に低下する。高濃度のNaClを維持する必要がある用途では、PEG 6000を含まない反応バッファーの使用を推奨する。
3. 標準的なベクター + インサートのライゲーションは、通常、10–20 μlの反応量で25°C、30分間行う。
4. 酵素を希釈して保存する場合、50%グリセロールを含む保存バッファーを用いて-20°Cで保存する。BSAが含まれていても問題ない場合、Diluent A (NEB #B8001)も使用できる。
5. T3 DNA Ligaseを含む反応溶液を65°Cで10分間加熱すると、酵素が不活化される。ただし、反応はPEGを含まないバッファーで実施する必要がある。反応バッファー中にPEGがある場合、形質転換が阻害されるため、加熱不活化は行わないこと。

1. Cai, L. et al. (2004). J. Biochem. 135, 397-403.
2. Bauer RJ, Zhelkovsky A, Bilotti K, Crowell LE, Evans TC Jr, McReynolds LA, et al. (2017). Comparative analysis of the end-joining activity of several DNA ligases. PLoS ONE. 12(12): e0190062., DOI: 0190062,

1. Ligation Protocol with T3 DNA Ligase (M0317)

• Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
• Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

• DNA Ligase Selection Chart
• Properties of DNA and RNA Ligases
• Substrate-based Ligase Selection Chart

• NEBcloner^®
• NEBioCalculator®

1. What type of DNA ends can T3 DNA Ligase ligate?
2. Can T3 DNA Ligase be used with a buffer that does not contain PEG?
3. Does T3 DNA Ligase have a higher tolerance to salt than T4 DNA Ligase?
4. Can T3 DNA Ligase be heat inactivated?
5. What are some potential problems with the ligation reaction using T3 DNA Ligase that can lead to transformation failure?
6. What are some other problems that should be considered when trouble shooting a transformation problem?
7. What problems can be encountered in the restriction digest that can cause ligation using T3 DNA Ligase or subsequent transformation to fail?
8. What controls should be run to test the cells and DNA when using T3 DNA Ligase?
9. How much DNA should be used in a ligation using T3 DNA Ligase?
10. Will T3 DNA Ligase work in rCutSmart Buffer?

品質管理試験はNEB製品の新しいロットごとに実施され、指定された仕様に適合することを確認している。品質管理試験内容は製品仕様書、分析証明書、データカードまたは製品マニュアルに記載されている。NEB製品の品質に関する詳細はこちら をご覧ください。

The Specification sheet is a document that includes the storage temperature, shelf life and the specifications designated for the product. The following file naming structure is used to name these document files: [Product Number]_[Size]_[Version]

• M0317S_L_v2

The Certificate of Analysis (COA) is a signed document that includes the storage temperature, expiration date and quality controls for an individual lot. The following file naming structure is used to name these document files: [Product Number]_[Size]_[Version]_[Lot Number]

• M0317S_L_v1_0021706
• M0317S_L_v1_0021711
• M0317L_v1_10015178
• M0317S_v1_10015180
• M0317L_v1_10026407
• M0317S_v1_10026409
• M0317L_v1_10039217
• M0317S_v1_10039219
• M0317L_v1_10047792
• M0317L_v1_10052788
• M0317L_v1_10059053
• M0317S_v1_10052790
• M0317L_v2_10066721
• M0317S_v2_10083376
• M0317L_v2_10094827
• M0317S_v2_10094830
• M0317L_v2_10108426
• M0317S_v2_10131941
• M0317L_v2_10154519
• M0317S_v2_10164701
• M0317L_v2_10184453
• M0317L_v2_10207425
• M0317S_v2_10205844
• M0317L_v2_10210697
• M0317S_v2_10218710
• M0317L_v2_10231224
• M0317S_v2_10243407
• M0317L_v2_10252945
• M0317L_v2_10256522
• M0317L_v2_10262396
• M0317S_v2_10272307
• M0317L_v2_10272308
• M0317L_v2_10288813
• M0317L_v2_10294627
• M0317L_v2_10306643
• M0317S_v2_10300319
• M0317L_v2_10309625
• M0317L_v2_10311929
• M0317S_v2_10314635
• M0317S_v2_10336824
• M0317L_v2_10319021
• M0317S_v2_10338590
• M0317S_v2_10345287
• M0317S_v2_10348822
• M0317L_v2_10348821
• M0317S_v2_10351627
• M0317L_v2_10357219
• M0317L_v2_10362965
• M0317S_v2_10358759

The following is a list of Safety Data Sheet (SDS) that apply to this product to help you use it safely.

• T3 DNA Ligase
• StickTogether™ DNA Ligase Buffer

製品および内容は、New England Biolabs, Inc (NEB)が所有または管理する1つまたは複数の特許、 商標 および/または著作権によって保護されている。商標記号の使用は、必ずしもその名称が読まれている国で商標登録されていることを示すものではなく、内容が最初に開発された場所を示すものである。本製品を使用することにより、購入者は特定の用途について第三者の知的財産権を追加取得する必要が生じる場合がある。詳細については、 tech.jp@neb.com .

まで電子メールでお問い合わせください。 本製品は研究目的でのみ使用できる。本製品は、ヒトまたは動物における治療または診断目的での使用を意図したものではない。

New England Biolabs (NEB)は、倫理的な科学の実践に取り組んでいる。私たちは、その答えが得られれば、私たちの生活の質および私たちの住む世界の保全に役立つ重要な疑問を投げかけることが、研究者としての私たちの仕事であると考えている。ただし、この研究は常に安全で倫理的な方法で行われるべきである。 詳細を見る.